在分离纯化方面，由于三缩四乙二醇与其他物质的化学性质相似，因此需要采用较为精密的分离方法来获得高纯度的产品。

常用的分离方法包括蒸馏、结晶、萃取等。其中，蒸馏是常用的分离方法之一，可以通过控制温度和压力来分离不同沸点的物质。结晶法则是利用三缩四乙二醇与其他物质的溶解度差异来进行分离，可以通过调节温度、加入沉淀剂等方法来促使晶体形成。萃取法则利用三缩四乙二醇在不同溶剂中的溶解度差异来进行分离，通常使用与水不互溶的有机溶剂进行萃取。